產(chǎn)品名稱：超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒(WST-8法)
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣,100管/96樣
產(chǎn)品貨號(hào)：LE-1-062,LE-2-062
產(chǎn)品報(bào)價(jià)：
免費(fèi)咨詢：0551-66107970
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
檢測(cè)方法 |
規(guī)格 |
售價(jià)（元） |
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LE-1-062 |
超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒 |
分光光度法 |
50管/48樣 |
400 |
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LE-2-062 |
超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒 |
微量法 |
100管/96樣 |
720 |
超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒說明書(分光光度法)
貨號(hào)：LE-1-062
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動(dòng)物 、植物 、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作 用 ，生成 H2O2 和 O2 。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。
測(cè)定原理：
通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.)，O2-.可與 WST-8 反應(yīng)產(chǎn)生水溶性染料甲臜， 后者在 450nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-. ，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液黃色越深，說明 SOD 活性愈低 ，反之活性越高。
試劑的組成和配制：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃避光保存；
試劑二：液體 300μL×1 支，4℃避光保存；
試劑三：液體 50μL×1 支，4℃保存；
試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
試劑五：液體 1.5ml×1 瓶，4℃保存；
自備儀器和用品：
分光光度計(jì) 、離心機(jī) 、移液器 、 1ml 玻璃比色皿 、研缽 、冰和蒸餾水
粗酶液提取：
1、細(xì)菌 、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（ 104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~ 1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或 細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰 上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（ g） ：提取液體積(ml)為 1 ：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g 組織，加入 1ml 提 取液） ，進(jìn)行冰浴勻漿 。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 450nm，蒸餾水調(diào)零。
2、試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋100 倍，用多少配多少 。（試劑三和蒸餾水 1：99 稀釋。)
3、工作液配制：在試劑一加入250μl 試劑二，充分混勻 。配好的試劑 4℃避光可保存一周 。（若一次性測(cè)定樣本較少，可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照 20ml：0.1ml 的比例混勻配制）
4、將一瓶試劑四用300ul 試劑五溶解后再加入 4.7ml 蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完）。
5、樣本測(cè)定（在 1ml 玻璃比色皿中依次加入下列試劑）
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試劑名稱( μl） |
測(cè)定管 |
對(duì)照管 |
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樣本 |
50 |
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蒸餾水 |
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50 |
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試劑三（稀釋后） |
50 |
50 |
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工作液 |
800 |
800 |
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試劑四 |
100 |
100 |
注意事項(xiàng):
1、試劑三為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、SOD 為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是 0.8-2 。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑三活性低，可以適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)；（2) 沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min 可以延長(zhǎng)到 40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑三未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大 ，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清 液用蒸餾水或提取液稀釋 10 倍后再測(cè)，通?？梢允箿y(cè)定正常 。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
SOD 活性計(jì)算：
1、抑制百分率的計(jì)算
抑制百分率＝(A 對(duì)照管－A 測(cè)定管) ÷A 對(duì)照管×100%
盡量使樣本的抑制百分率在 10-90% 范圍內(nèi) 。如果計(jì)算出來的抑制百分率小于 10% 或大于 90% ，則通常需要調(diào)整加樣量后重新測(cè)定。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高，則需將樣本用提取液適當(dāng)稀釋；如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度比較高的待測(cè)樣本。
2、SOD 酶活性單位：在上述黃嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為 50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的 SOD 酶活力定義為一個(gè)酶活力單位(U/ml)。
3、SOD 酶活性計(jì)算：
（1）血清（漿）SOD 活性(U/ml)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷V 樣
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)
（2）組織、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞 SOD 活力計(jì)算：
a.按樣本蛋白濃度計(jì)算
SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(V 樣×Cpr)
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr
需要另外測(cè)定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。
b.按樣本鮮重計(jì)算
SOD 活性(U/g 鮮重)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反總]÷(W ×V 樣÷V 樣總)
=20×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W
c.按細(xì)菌或細(xì)胞個(gè)數(shù)計(jì)算
SOD活力(U/104 cell)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率) ×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)
=0.04×抑制百分率÷(1－抑制百分率)
V 反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.05ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml ；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。
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